Y190酵母化學感受態細胞

Y190 Chemically Competent Cell

酵母菌化學感受態細胞

溫馨提示

見我司（懋康生物）整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產品專題。

產品關鍵詞：

Y190-GAL4酵母單雜交系統；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金擔子素；

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產品組分：

產品描述

Y190是GAL4系統酵母雙雜交用實驗菌株，MATa型，能直接轉化質粒或與MATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進行蛋白相互作用驗證或篩庫實驗。轉化標志為trp1，leu2，cyh2。報告基因為lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母雙雜交系統需要兩種質粒配套使用，pGB&pACT2或pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而來，篩選標志為Trp，用于表達DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；pACT2和pGADT7的結構和功能類似，篩選標志為Leu，用于表達AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。

本品為經特殊工藝制備的Y190酵母菌化學感受態細胞，用pGADT7質粒檢測轉化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存三個月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyh^r2, LYS2 : : GAL1 _UAS-HIS3_TATA^-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1_UAS-GAL1_TATA-lacZ

注意事項

1. 號在冰上融化感受態細胞。
2. 轉化高濃度質粒可相應減少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質粒可適當增加質粒的用量。
3. Y190對高溫敏感，適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉化率都呈指數下降。
4. 菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細胞生長中的一種常見現象。當酵母細胞在平板上培養幾天，將平板內的腺嘌呤消耗殆盡，那時酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中間產物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細胞的積累使得菌落變為粉紅色。
5. 酵母菌在缺陷培養基上生長速度比YPDA培養基慢，營養缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養可見直徑1mm克隆；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養可見直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養可見直徑1mm克隆；
6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. Carrier DNA于使用前通過加熱處理使其變性為單鏈狀態，方法如下：95-100℃ 水浴或金屬浴3min，快速插入冰中，靜置3min。重復一次。
2. 取100 µl冰上融化的Y190化學感受態細胞，依次加入預冷的目的質粒0.5-3 µg，單鏈Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時翻轉6-8次混勻）。
3. 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時翻轉6-8次混勻）。
4. 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH₂O重懸沉淀，離心30s棄上清。
5. 用50 µl ddH₂O重懸，涂板，放入29℃培養48-96 h。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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Y190酵母化學感受態細胞

Y190酵母化學感受態細胞