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          潮霉素B Hygromycin B穩定轉染細胞的篩選

            潮霉素B Hygromycin B穩定轉染細胞的篩選

            1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

            注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷效果。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,將細胞稀釋至豐度不超過25%。

            2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

            3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。

            4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

            5) 之后更換正常培養基培養即可。

            潮霉素B Hygromycin B時的注意事項

            1) 潮霉素B Hygromycin B的抗性基因(hyg或hph)除了來自E. Coli.之外,還發現于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

            2) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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