酵母菌化學感受態細胞表達分析

BY4741 Chemically Competent Cell 

酵母菌化學感受態細胞

溫馨提示

見我司（懋康生物）整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產品專題。

產品信息

產品包裝

保存與運輸方法

保存：其中感受態細胞按標簽注明置于-80℃保存，三個月有效。其他組分按照標簽注明保存，一年有效。

運輸：干冰運輸。

產品描述

BY4741菌株是來源于S288C的一組缺失菌株成員之一，這些菌株通過敲除其常用選擇性標記基因來最小化或去除與對應載體上常用的選擇性標記基因的同源性，同時不會顯著影響鄰近基因的表達。BY4741是實驗室常用菌株，為配子MATa型，廣泛應用于鈉-鉀離子平衡，細胞抗鹽，各種金屬離子的吸收，重金屬毒性研究，各種糖類、碳源對真核細胞生長的影響，以及過氧化物、超氧化物的吸收和運輸的研究中。

BY4741菌株是組氨suan、亮氨suan、甲硫氨suan和尿mi啶缺陷型菌株，可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入BY4741細胞。質粒pYES2的篩選標志為Ura，可用SD-Ura進行篩選。

本品為經特殊工藝制備的BY4741酵母菌化學感受態細胞，用pYES2質粒檢測轉化效率＞103cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存三個月。

基因型

MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52

注意事項

1. 最好在冰上融化感受態細胞。

2. 轉化高濃度質粒可相應減少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質粒可適當增加質粒的用量。

3. BY4741對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉化率都呈指數下降。

4. 若使用pYES2質粒表達蛋白，需在培養基中加入2%半乳糖，以誘導目的基因的表達。注意篩選培養基中不用加半乳糖。當需要目的蛋白表達時，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源。

5. 酵母菌在缺陷培養基上生長速度比YPDA培養基慢，營養缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養可見直徑1mm克隆；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養可見直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養可見直徑1mm克隆；

6. 酵母感受態細胞不易長期保存，隨著保存時間的延長轉化效率會不斷下降，建議不超過3個月。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. Carrier DNA于使用前通過加熱處理使其變性為單鏈狀態，方法如下：95-100℃水浴或金屬浴3min，快速插入冰中，靜置3min。重復一次。

2. 取100 µl冰上融化的BY4741化學感受態細胞，依次加入預冷的目的質粒1-3 µg，單鏈Carrier DNA10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時翻轉6-8次混勻）。

3. 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時翻轉6-8次混勻）。

4. 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH2O重懸沉淀，離心30s棄上清。

5. 用50 µl ddH2O重懸，涂板，放入29℃培養48-96 h。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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