大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析
簡要描述：
大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析BL21-CodonPlus菌株來源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特別適合在大腸桿菌內(nèi)高水平表達異源蛋白。由于異源蛋白來源宿主大量存在的某些tRNA在大腸桿菌內(nèi)很是稀少，因此，想在大腸桿菌內(nèi)有效表達異源蛋白通常受到限制。外力驅(qū)動下的高水平表達異源蛋白會耗盡已有的稀有tRNA，導致翻譯中止。
產(chǎn)品時間：2024-12-16
打印當前頁BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2337-1000UL | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell化學感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 450 |
MF2337-5000UL | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell化學感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1880 |
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2337-1000UL | MF2337-5000UL | ||
MF2337-A | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2337-B | Control Plasmid puC19, 10 pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21-CodonPlus菌株來源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特別適合在大腸桿菌內(nèi)高水平表達異源蛋白。由于異源蛋白來源宿主大量存在的某些tRNA在大腸桿菌內(nèi)很是稀少，因此，想在大腸桿菌內(nèi)有效表達異源蛋白通常受到限制。外力驅(qū)動下的高水平表達異源蛋白會耗盡已有的稀有tRNA，導致翻譯中止。BL21-CodonPlus菌株正是根據(jù)此缺陷而基因改造后的菌株，額外添加在大腸桿菌內(nèi)最常見限制異源蛋白表達的幾種tRNA的基因拷貝。這些tRNA的存在使得許多原來在傳統(tǒng)BL21菌株內(nèi)表達很弱的異源蛋白能夠在BL21-CodonPlus菌株內(nèi)大量表達。BL21-CodonPlus-RIPL補充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子（AGA, AUA, CCC, CUA）對應的tRNA（argU, ileY, proL, leuW），顯著提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-基因的異源蛋白在大腸桿菌內(nèi)的表達。
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株染色體還整合了λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因），可用于pET系列、pGEX、pMAL等載體的蛋白表達，同時具有四環(huán)素，氯mei素，鏈mei素和壯觀mei素抗性。
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株基因型：F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ TetRgal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱激轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
保存與運輸條件
保存：-80℃保存，六個月有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2） 最好在冰上融化感受態(tài)細胞。
3） 進行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。
4） 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。
5） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。
6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】
1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。
2） 42℃熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。
3） 向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
4） 低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含氯mei素（34μg/ml）以及所選質(zhì)粒篩選抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
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名稱 | 規(guī)格 | |
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MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸鏈mei素 | 25g |
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MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt氨芐青mei素鈉 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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