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          羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒 細胞增殖

          羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒 細胞增殖

          簡要描述:

          羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒 細胞增殖 羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒(Rhodamine 123 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一種以羅丹明123為熒光探針,快速且靈敏的檢測細胞或純化線粒體膜電位變化的試劑盒。

          產(chǎn)品時間:2024-05-29

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          Rhodamine 123 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit

          羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒


           

          產(chǎn)品信息

          產(chǎn)品名稱

          產(chǎn)品編號

          規(guī)格

          價格(元)

          羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒

          MX3209-100T

          100T

          390


          產(chǎn)品描述

          羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒(Rhodamine 123 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一種以羅丹明123為熒光探針,快速且靈敏的檢測細胞或純化線粒體膜電位變化的試劑盒。因線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。因此本試劑盒可用于早期的細胞凋亡檢測。

          羅丹明123(Rhodamine 123,簡寫:Rh123),一種細胞膜滲透性的陽離子熒光探針,一種線粒體跨膜電位的指示劑。羅丹明123快速穿透細胞膜,僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體所俘獲,且對細胞沒有任何毒性。激發(fā)波長為507nm,發(fā)射波長為529nm。熒光顯微鏡下觀察,呈現(xiàn)黃綠色熒光,也可用熒光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測,通過熒光信號的強弱來判斷線粒體膜電位的變化和凋亡或壞死的發(fā)生。

          羅丹明123檢測線粒體膜電位的原理在于:正常細胞中,羅丹明1223依賴線粒體跨膜電位(ΔΨm)選擇性進入線粒體基質(zhì),可發(fā)出明亮的黃綠色熒光;當細胞發(fā)生凋亡或壞死,線粒體膜電位喪失,線粒體通透性轉(zhuǎn)化孔持續(xù)開放,引起線粒體膜電位的崩潰,羅丹明123從線粒體中釋放出來,從而導致線粒體內(nèi)黃綠色熒光強度的明顯降低。需注意,有文獻報道在某些特定情況下,羅丹明123在線粒體內(nèi)過度聚集后可能出現(xiàn)自淬滅現(xiàn)象,線粒體內(nèi)黃綠色熒光強度降低;而在凋亡發(fā)生時,線粒體中黃綠色熒光增強。


          產(chǎn)品包裝

          編號

          組分名稱

          規(guī)格

          保存方法

          MX3209-A

          羅丹明123染液(1mg/ml)

          1ml

          -20℃避光,避免反復凍融

          MX3209-B

          染色緩沖液(5×)

          20ml

          -20℃或4℃


          保存與運輸方法

          保存:-20℃避光保存,1年有效。

          運輸:冰袋運輸。


          注意事項

          1) 羅丹明123染液(1mg/ml)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20~25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

          2) 本試劑盒僅適用于活細胞或分離線粒體的檢測,不可用于固定或凍存的細胞或組織樣本的檢測。

          3) 熒光酶標儀檢測時須使用適合熒光檢測的黑板或白板。

          4) 如實驗需要,可選擇CCCP(MX3258)或FCCP(MX3259)用作陽性對照,誘導線粒體膜電位喪失。

          5) 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

          6) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


          需要自備的儀器和試劑

          1) 流式細胞儀、熒光光度計、熒光酶標儀、熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡(激發(fā)波長:488-505nm,發(fā)射波長:515-575nm,一般為529nm)。

          2)【可選】線粒體提取試劑及其配套儀器   3)1.5ml微量離心管    4)載玻片   5)無菌雙蒸水


          使用方法

          1、試劑準備

          于正式實驗前,取適量低溫保存的染色緩沖液(5×)用無菌雙蒸水稀釋到1×,待用。(比如:1ml染色緩沖液(5×)加入4ml雙蒸水,混勻即可)。


          2、細胞染色及分析

          2.1收集培養(yǎng)細胞調(diào)整其密度為1×106/ml,重懸于培養(yǎng)基中;

          2.2加入羅丹明123染液(1mg/ml) 使其濃度為:0.1 - 50 µg/ml(根椐細胞種類不同而濃度不同,一般染色濃度為3 - 10 µg/ml);

          2.3 37℃孵育1 - 30 min(根椐細胞種類不同而不同,一般染色時間為10 min);

          2.4離心后用培養(yǎng)基洗細胞兩次;

          2.5重懸細胞于培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)60 min;

          2.6根據(jù)實驗需求,選擇合適的儀器檢測:

          ① 流式細胞儀檢測:激發(fā)波長488-505nm,發(fā)射波長515-575 nm(一般為529nm);

          ② 熒光顯微鏡觀察:滴加100 µl上述混合液于載玻片上,激發(fā)濾片波長488nm,發(fā)射波長為529nm觀察。


          3、線粒體染色及分析

          3.1按照常規(guī)方法提取線粒體(或根據(jù)商業(yè)化的線粒體提取試劑盒來操作),之后用適量的1×染色緩沖液重懸線粒體;

          3.2按照常規(guī)方法進行蛋白含量測定,之后用1×染色緩沖液調(diào)配成3mg/ml蛋白濃度的線粒體溶液;

          3.3取2ml 1×染色緩沖液和1ml線粒體溶液;

          3.4加入適量待測化合物(同時設置陰性對照組),25℃孵育3min;

          3.5加入10µl羅丹明123染液;

          3.6用熒光光度計來檢測:將上述混合液全部加入石英比色皿中,置于25℃測定,激發(fā)波長488-505nm,發(fā)射波長529nm,連續(xù)記錄從0-30min內(nèi)熒光強度的變化。亦可以用熒光酶標儀來檢測,激發(fā)波長為507nm,發(fā)射波長為529nm;或在軟件中將檢測對象設置為FITC,即可檢測羅丹明123的信號。


          4、熒光觀測和結(jié)果分析

          羅丹明123的激發(fā)波長為507nm,發(fā)射波長為529nm。如使用熒光顯微鏡觀察,可以參考觀察FITC等其它綠色熒光檢測時的設置。黃綠色熒光變?nèi)酰f明線粒體膜電位下降,并且該細胞很可能處于細胞凋亡早期。通過對比實驗組與陰性對照組測量的相對熒光值(Relative fluorescence values, RFU),可得出藥物處理后線粒體內(nèi)羅丹明123熒光強度的變化。此處的陰性對照組為僅含染色緩沖液未經(jīng)染色的細胞樣品。



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          CCCP (Powder)凋亡誘導劑/質(zhì)子載體

          10mg

          MX3259-10MG

          FCCP (Powder)凋亡誘導劑/質(zhì)子載體

          10mg

           

          羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒 細胞增殖羅丹明123線粒體膜電位檢測試劑盒 細胞增殖

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