超敏型ECL化學發光顯色試劑盒免疫學分析

SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit

超敏型ECL化學發光顯色試劑盒

產品信息

產品描述

超敏型ECL化學發光顯色試劑盒（SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit）是靈敏的、基于魯米諾的新一代增強型化學發光HRP底物，通過Western Blot能實現低皮克級的蛋白檢測。

超敏型ECL化學發光顯色試劑盒特別設計專為使用HRP偶聯的Western Blot實驗提供*的信號和低皮克靈敏度。其發光強度和好的的信號持續允許多次曝光，更容易收集到發文質量的印記圖像。本品能兼容各種印跡膜、封閉液和大量的抗體稀釋液，能夠滿足絕大部分的Western blot應用需求。

超敏型ECL化學發光顯色試劑盒的檢測靈敏度和使用方法類似于Thermo Scientific™的SuperSignal™ West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate，具有以下*的特征：

• 低皮克級靈敏度：檢測NC膜或PVDF膜上低皮克級的蛋白條帶；

• 長信號持續時間：在優化條件下，經底物孵育的印跡條帶能持續輸出6~8h的可檢測光信號；

• 試劑穩定性高：工作液在8h內穩定，試劑盒在4℃可穩定放置1年；

• 經濟實惠：對稀釋抗體濃度進行優化

﹒0.2~1.0µg/ml一抗（從1µg/ml儲存液稀釋1:1,000~1:5,000倍）

﹒10~50ng/ml二抗（從1µg/ml儲存液稀釋1:20,000~1:100,000倍）

產品組成

注意事項

1） 為獲得醉加實驗效果，應注意優化實驗條件，包括樣品用量、凝膠類型、轉膜方法、膜的類型、封閉液、洗滌液、一抗/二抗稀釋度以及孵育時間等。

2） 洗滌液、封閉液、抗體稀釋液、SuperSignal ECL工作液應足量使用，確保印跡膜處于濕潤狀態。

3） 為獲得醉加實驗效果，孵育過程中使用搖動或擺動工作臺。

4） 緩沖液中避免使用疊氮鈉作為防腐劑，因其會抑制HRP活性。

5） 使用親和素/系統時，應避免使用脫脂奶粉的封閉液。

6） SuperSignal ECL A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭，上述試劑相互污染后會導致SuperSignal ECL A液和B液逐漸失效，影響后續的使用效果。

7） SuperSignal ECL A液和B液使用后，請蓋緊瓶蓋以防失效， 特別是B液含有氧化劑，比較容易被還原而失效。

8） SuperSignal ECL熒光持續時間很長，但開始反應后的30min內熒光更強一些，隨后熒光會逐漸減弱，因此請注意充分利用這熒光較強的30min進行曝光或成像儀檢測。

9） SuperSignal ECL工作液室溫能穩定保存8h，暴露在陽光或其他強光下都會破壞工作液。短期暴露在實驗室光線下不會破壞工作液。

10） SuperSignal ECL A液和B液均對人體有害，操作時請注意適當防護。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

需要自行準備材料

• Western Blot印跡膜：用合適方法電泳分離蛋白，并將這些蛋白轉移到所需的印跡膜上。

• X光片或成像儀

• 旋轉或搖擺平臺振蕩器：孵育過程中用于膜的搖動。

• 稀釋液、洗滌液、封閉液

• 一抗、HRP標記的二抗

• 用于X光片曝光用的暗盒、顯影和定影液

Western Blot操作步驟

【注意】：為獲得醉加實驗效果，應注意優化整個實驗過程中的組分和步驟。

1） 將印跡膜從蛋白轉印儀中取出，加入合適的封閉液在室溫下孵育20~60min，保持振蕩，以封閉膜上非特異性蛋白結合位點。對于一些背景較高的抗體，可以在4℃封閉過夜。

2） 將印跡膜從封閉液中取出，加入一抗工作液中室溫或4℃孵育1h，保持振蕩。如果一抗孵育1h效果不佳，可在4℃孵育過夜，保持震蕩。或根據一抗說明選擇適當的孵育溫度和時間。

3） 將足量的洗滌液加入膜上，保證*覆蓋膜。振蕩孵育≥5min，更換洗滌液并重復該步4~6次。增加洗滌液體積、洗滌次數和洗滌時間有助于降低背景信號。

4） 將印跡膜加入HRP標記的二抗工作液中，室溫孵育1h，保持振蕩。或根據二抗說明選擇適當的孵育溫度和時間。

5） 重復步驟3），充分洗滌以去除未結合的HRP標記二抗。

6） 用鑷子將膜輕輕取出，用吸水紙略吸去過多的液體（勿接觸膜的蛋白面），然后置于一潔凈保鮮膜或恰當容器上。

7） 配制SuperSignal ECL工作液：根據需要量，取A液和B液等體積混合即為SuperSignal ECL工作液，室溫放置備用，工作液宜在臨檢前配制。

8） 根據膜的大小，按每10cm²膜加1ml SuperSignal ECL工作液的比例，滴加SuperSignal ECL工作液到膜上，確保工作液均勻覆蓋在膜上，孵育5min。

9） 從工作液中取膜，棄SuperSignal ECL工作液，用吸水紙略吸去過多的液體。將膜放在兩片保鮮膜中間（避免膜與膜之間產生氣泡），隨后進行壓片檢測或成像儀檢測。

① 壓片檢測：a）將膜固定于膠片暗盒片夾內，蛋白面朝上，除適用于膠片曝光用的燈（如紅燈）之外，關閉所有的燈。b）將X光片置于膜的上面，建議一次曝光1min，立即顯影定影，根據結果再調整曝光時間，或直接分別曝光1，3，5min，然后一起顯影定影觀察結果。化學發光反應在底物孵育后的前5-30min是醉強烈的，這一反應可持續幾個小時，但強度會隨時間下降，如有底物孵育后較長時間才曝光，曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。

11） 采用熒光成像儀檢測：將膜放置到熒光成像儀內，參考儀器說明書進行檢測。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

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