螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè) 探針與染色

Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit

螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品標(biāo)簽

Firefly Luciferase 螢火蟲(chóng)熒光素酶；Photinus pyralis；報(bào)告基因檢測(cè)；D-luciferin sodium D-熒光su鈉鹽；ATP生物發(fā)光檢測(cè)；CAS：61970-00-1；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

螢火蟲(chóng)螢光素酶（Firefly Luciferase）普遍用作一種報(bào)告基因來(lái)研究基因調(diào)控和功能，以及用于藥物篩選。由于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織缺乏任何內(nèi)源性的熒光素酶活性和生物發(fā)光的天然屬性，螢火蟲(chóng)熒光素酶是一種非常靈敏的遺傳報(bào)告子。螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種分子量~61kD的蛋白，在A(yíng)TP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素（Luciferin）氧化成氧化熒光素（Oxyluciferin），在此氧化過(guò)程中釋放出生物螢光（Bioluminescence）。這一熒光可通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀（Luminometer）或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。

本螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit），正是利用螢光素為底物來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)螢火蟲(chóng)螢光素酶活性的試劑盒，操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏且呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

產(chǎn)品組分

保存與運(yùn)輸方法

保存：細(xì)胞裂解液置于4℃保存三個(gè)月有效，-20℃保存一年有效；螢火蟲(chóng)熒光素酶檢測(cè)試劑置于-20℃六個(gè)月有效，-80℃避光保存一年有效；

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

• 為了保證螢火蟲(chóng)熒光素酶檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，建議初次使用進(jìn)行適當(dāng)分裝，避光凍存，盡量降低反復(fù)凍融次數(shù)。內(nèi)部測(cè)試顯示反復(fù)凍融三次對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。

• 由于溫度對(duì)酶活性有影響，測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。

• 為取得加測(cè)定結(jié)果，用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí)，樣品和試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間需盡量控制在相同時(shí)間，比如30s內(nèi)；使用具化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí)，hao xian把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲(chóng)熒光素酶檢測(cè)試劑。

• 樣品和試劑混合后，必須等待1~2s，再進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)間通常為10s，根據(jù)情況可適當(dāng)延長(zhǎng)或縮短，但同一批樣品宜使用相同的測(cè)定時(shí)間。

• 為避免由于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率差異引起的誤差，可同時(shí)轉(zhuǎn)入海腎熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參，用我司的雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：MF4010-100T）進(jìn)行檢測(cè)。

• 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 細(xì)胞裂解

1.1 將含轉(zhuǎn)染有報(bào)告基因質(zhì)粒的細(xì)胞內(nèi)的培養(yǎng)基去除，對(duì)于貼壁細(xì)胞直接加PBS輕輕洗滌，對(duì)于懸浮細(xì)胞，低速離心收集細(xì)胞后用PBS輕輕洗滌。

1.2 將細(xì)胞裂解液充分混勻后，按下表用量來(lái)加入適量細(xì)胞裂解液，之后將培養(yǎng)板放在微型振蕩器上室溫震蕩15min，以充分裂解細(xì)胞。

1.3 將充分裂解后的產(chǎn)物于10,000~15,000rpm室溫離心3~5min，取上清用于測(cè)定。

二、 熒光素酶檢測(cè)

2.1 融解螢光素酶檢測(cè)試劑，并達(dá)到室溫。

2.2 按儀器說(shuō)明書(shū)開(kāi)啟化學(xué)發(fā)光儀或具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光功能的多功能酶標(biāo)儀，設(shè)定參數(shù)，測(cè)定間隔設(shè)為2s，測(cè)定時(shí)間設(shè)為10s。

2.3 將細(xì)胞裂解產(chǎn)物按照20~100μl的體積加入測(cè)量管中（如果裂解產(chǎn)物足夠，請(qǐng)加入100μl；如果裂解產(chǎn)物不足可以適當(dāng)減少用量，但同批裂解產(chǎn)物的使用量宜保持*）。

2.4 加入100μl螢光素酶檢測(cè)試劑，用槍打勻或用其它適當(dāng)方式混勻后測(cè)定RLU（Relative light unit）。以細(xì)胞裂解液為空白對(duì)照。

相關(guān)產(chǎn)品

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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