DH5α大腸桿菌電轉感受態細胞
簡要描述：
DH5α大腸桿菌電轉感受態細胞 是實驗室較常用的一種質粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的產物可與載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用于藍白斑篩選。
產品時間：2019-06-29
打印當前頁DH5α Electrocompetent cell
大腸桿菌電轉感受態細胞
產品標簽：
DH5α Electrocompetent Cell 電ji感受態細胞；*0；DH10B；XL1-Blue；1mm電轉杯（電ji杯）；Biorad 1652083；
產品訂購：
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格（元） |
MF2381-0250UL | DH5α Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉感受態細胞 | 5×50μl | 540 |
MF2381-1000UL | DH5α Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉感受態細胞 | 20×50μl | 1730 |
菌株描述
DH5α是實驗室常用的一種質粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的產物可與載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。特別適用于高效的質粒DNA克隆并能保證高拷貝質粒的穩定復制。
DH5α菌株基因型： F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA
產品描述
本品是大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制作所得的電ji感受態細胞，只能用于DNA的電ji轉化，不能用于熱激轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達1×1010 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。
產品包裝
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規格） | |
MF2381-0250UL | MF2381-1000UL | ||
MF2381-A | DH5α Electrocompetent cell | 5×50μl | 20×50μl |
MF2381-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，六個月有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態細胞保存在-80℃以下，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。
- 整個轉化操作，嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。
- 加入DNA的體積不應大于感受態體積的1/10。DNA不純或存在鹽、乙醇、蛋白及緩沖液等污染時，會導致轉化效率急劇下降。
- 為確保高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。
5） 電ji感受態細胞加入電ji杯應避免產生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。
6） 電ji杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和DNA的溶液中產生電流和弧光放電的風險。
7） 若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
8） 對于連接產物轉化：在轉化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液重懸產物，保證DNA濃度不超過100ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。
9） 混入質粒時應輕柔操作，吸取感受態細胞時不可用孔徑過小的槍頭（普通200μl槍頭應剪去槍頭尖0.6cm）。避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃度的質粒或連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。
10） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】
1）將0.1 cm電ji杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發干凈，立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。
2）取-80℃保存的電ji感受態細胞插入冰中5min，待其*融化。加入目的DNA（質粒或連接產物），用手拍打管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。
【注意】：①若需要測定轉化效率，使用1μl 對照質粒 pUC19（10 pg/μl）；②對于連接產物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE buffer（貨號：MS3537-500ML）重懸，DNA濃度不要超過100ng/μl，體積不超過5μl/50μl感受態。
3）用200μl槍頭將感受態-DNA混合物快速移到電ji杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。
4）啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 ohm，V=1800 V（此參數參考Bio-rad，具體使用請參考電轉儀推薦步驟來操作），將電ji杯快速放入電轉槽中，電ji完成快速插入冰中。
5）2min后從冰中取出電ji杯，放室溫，加入700μl不含抗生素的無菌SOC培養基（室溫），用1ml槍吹吸電ji杯底部數次混勻后，轉移到50ml離心管（比如：BD Falcon 50ml錐形離心管），向離心管中補加SOC培養基至5ml。37℃，225 rpm復蘇60min。
6) 5000rpm，1min離心收菌，重懸后取100-200μl涂布到含相應抗生素的SOC平板上（因菌量較大，若全部
涂板請選用直徑15cm培養皿2-5個）。將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養13-17h。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
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