酵母感受態細胞 克隆與表達分析

Y2HGold Chemically Competent Cell

酵母菌化學感受態細胞

產品標簽

Matchmarker GAL4雙雜交系統；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金擔子素；

產品信息

產品包裝

產品描述

Y2HGold是GAL4系統酵母雙雜交用實驗菌株，能直接轉化質?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進行蛋白相互作用驗證或雙雜交文庫篩選和構建。Y2HGold-GAL4酵母雙雜交系統需要兩種質粒配套使用，分別為pGBKT7和pGADT7。前者篩選標志為Trp1，用于表達DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；后者篩選標志為Leu，用于表達AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y2HGold有四個報告基因：AUR1-C，HIS3, ADE2, MEL1，分別由三個*異源的Gal4反應啟動元件-G1，G2，M1操控，這三種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母雙雜交假陽性發生的概率。此外，新報告基因AUR1-C與以往的營養缺陷報告基因相比，具有更低背景，這一優勢也可降低酵母雙雜交假陽性發生的概率。

本品為經特殊工藝制備的Y2HGold酵母菌化學感受態細胞，用pGADT7質粒檢測轉化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存三個月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1_UAS^-Gal1_TATA^-His3, GAL2_UAS^- Gal2_TATA^-Ade2 URA3::MEL1_UAS^-Mel1_TATA AUR1-C MEL1

注意事項

1. 在冰上融化感受態細胞。

2. 轉化高濃度質?？上鄳獪p少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質?？蛇m當增加質粒的用量。

3. Y2HGold對高溫敏感，zui適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉化率都呈指數下降。

4.菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細胞生長中的一種常見現象。當酵母細胞在平板上培養幾天，將平板內的腺嘌呤消耗殆盡，那時酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中間產物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細胞的積累使得菌落變為粉紅色。

5. 酵母菌在缺陷培養基上生長速度比YPDA培養基慢，營養缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養可見直徑1mm克??；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養可見直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養可見直徑1mm克隆；

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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