核酸凝膠染料
簡(jiǎn)要描述：
核酸凝膠染料適用范圍廣：可選擇電泳前染色（膠染法）或電泳后染色（泡染法）；適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-03-21
打印當(dāng)前頁(yè)MKRed（效果同GelRed）核酸染料（10,000× 水溶液）
MKRed核酸凝膠染料特點(diǎn)
● 無(wú)毒性：MKRed *的油性和大分子量特點(diǎn)使其不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果也表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于EB。
● 靈敏度高：適用于各種大小片段的電泳染色，對(duì)核酸遷移的影響小于SYBR Green I。
● 穩(wěn)定性高： 適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定，耐光性強(qiáng)。
● 信噪比高：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低。
● 操作簡(jiǎn)單：與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過(guò)程中染料不降解；而電泳后染色過(guò)程也只需30 分鐘且無(wú)需脫色或沖洗 ，即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。
● 與EB有相同的光譜特性，無(wú)需改變?yōu)V光片及觀察裝置：標(biāo)準(zhǔn)的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用，使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在 300nm 紫外光附近可得到zui好激發(fā)。但是MKRed不能被488 nm氬離子激光器或相似波長(zhǎng)的可見光*激發(fā)，因此不推薦使用此類激發(fā)裝置的成像系統(tǒng)。對(duì)于此類裝置，我們推薦您使用DuGreen（Cat# 011或012），它和SYBR Green I的光譜相似，靈敏度相當(dāng)，但更加穩(wěn)定。
核酸凝膠染料使用方法簡(jiǎn)介
1．膠染法（用法同EB）（推薦方法）
（1） 制膠時(shí)加入MKRed 核酸染料（例如：每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL MKRed 10,000× 儲(chǔ)液，
以此比例類推）。
（2） 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
注意事項(xiàng)：
♦ 此方法染色染料用量相對(duì)較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
♦ 由于MKRed具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將MKRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。MKRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
♦ 如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認(rèn)問(wèn)題是否與染料有關(guān)。如果染色后問(wèn)題依舊存在，則說(shuō)明問(wèn)題與染料無(wú)關(guān)，請(qǐng)嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長(zhǎng)的凝膠；延長(zhǎng)凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰；改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。
♦ 此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。
2．泡染法
（1） 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
（2） 用H2O將MKRed 10,000× 儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。（例如將15μL MKRed 10,000× 儲(chǔ)液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。
（3） 將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒(méi)凝膠。室溫振蕩染色30min左右，zui合適染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時(shí)間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長(zhǎng)。
注意事項(xiàng)：
♦ 用泡染法染色時(shí)，染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。
♦ 3× MKRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。
幾種核酸染料比較
名稱 | 靈敏度 | 穩(wěn)定性 | 對(duì)DNA 遷移的影響 | 安全性 | 適用性 |
MKRed | 高 | 高 | 條帶不彎曲，DNA片段不遷移 |
| 通用大小片段電泳染色，與EB有相同的光譜特性，無(wú)需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標(biāo)準(zhǔn)的EB濾光片或SYBR濾光片都適用，使用普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在300nm紫外光附近可得到zui好激發(fā)。 |
MKGreen | 高 | 高 | 條帶不彎曲，DNA片段不遷移 | ① 是一種*的油性大分子，不易揮發(fā)升華，不易吸入人體，不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)，安全無(wú)毒。 | 通用大小片段電泳染色，適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
SYBR Green I | 高 | 低 | 染料濃度較高時(shí)，條帶容易彎曲，DNA片段遷移的現(xiàn)象明顯 | 屬花箐染料，能透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)，但容易生物降解，不會(huì)在體內(nèi)殘留，安全無(wú)毒。 | 100bp以上電泳染色，適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
EB | 低 | 高 | 條帶不彎曲，DNA片段不遷移 | ① 分子量小，易揮發(fā)升華，易吸入人體，不易生物降解，在體內(nèi)長(zhǎng)期殘留。 | 100bp以上電泳染色，背景熒光信號(hào)高；使用普通紫外凝膠透射儀觀察。 |
Goldview | 低 | 高 | 條帶不彎曲，DNA片段不遷移 | ① 主要成分為吖啶橙，是一種煤焦油提取物，具有高毒，致癌，高誘變性。 | 100bp以上電泳染色，背景熒光信號(hào)高；適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
特別提醒：
♦ 如果您使用的是紫外成像儀，請(qǐng)選擇MKRed；如果您使用激光成像儀或希望在可見光下觀測(cè)，請(qǐng)選擇 MKGreen。
♦ 在極少數(shù)情況下，質(zhì)粒經(jīng)某些酶切后的DNA樣品會(huì)出現(xiàn)拖尾和分辨率降低，此時(shí)建議同時(shí)嘗試兩種染色方法以決定哪種方法更加合適。
訂購(gòu)信息：
品名 | 產(chǎn)地 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 單價(jià) | 備注 |
MKRed（10,000× 水溶液） | MKbio | MF0754-500UL | 500ul | 460 | 現(xiàn)貨 |